التحليل الكيميائى للدم

موضوع: التحليل الكيميائى للدم 2009-07-25, 03:46

السلام عليكم ورحمة الله وبركاته
الحمدلله والصلاة والسلام على رسول الله وعلى آله وصحبه أجمعين

التحليل الكيميائي للدم

يشمل التحليل الكيمائي للدم تقدير المركبات العديدة التي توجد في الدم مثل الجلوكوز – البولينا – حمض البوليك – الصوديوم والبوتاسيوم – البروتينات – الانزيمات – الهرمونات ......
سنتناول في هذا الدليل شرح الاختبارات التي ينبغي إجراؤها في معامل الرعاية الأساسية والتي تتوافر الإمكانيات لإجرائها.

فكرة تقدير المركبات الكيميائية في الدم

تعتمد معظم هذه الفحوص علي تفاعل كاشف أو كواشف مع المركب المطلوب تقديره وينتج عن هذا التفاعل محلول ملون تقاس كثافته باستخدام أجهزة القياس الضوئي أو أجهزة القياس الضوئي الطيفي [size=7]Colorimeters or- spectrophotometers[size=12] مقارنة بمحلول قياس ( معياري)

العينة Specimen

يفضل استخدام المصل في معظم الاختبارات ويفضل دائما إجراء الاختبار بعد فصل المصل Serum ، وإذا تأخر أجراء التحليل يحفظ المصل في الثلاجة . وبصفة عامة يفضل إجراء الاختبارات علي عينة صيام.
المحلول القياسي ( المعياري) Standard Solution

هو محلول يتم تحضيره بتركيز معروف من المادة المراد تقديرها ويعامل في الاختبار مثل العينة – مثلا المحلول القياسي للجلوكوز هو محلول مائي علي تركيز معروف من الجلوكوز النقي الجاف.

كيفية استخدام أجهزة القياس الضوئي للحصول علي النتائج

تشتمل هذه الأجهزة علي نوعين من القياسات.
الامتصاص
Absorbance "A"
النفاذية
Transmittance "T"

الخطوات :

يضبط الطول الموجي المناسب لقراءة الاختبار
يضبط صفر الامتصاص (A) بالمحلول الخالي ( البلانك Blank )
تقرا أنبوبة العينة ( الاختبار T)

ثم تحسب قيمة المركب ( النتيجة) باستخدام المعادلة آلاتية :
قراءة الاختـــبـار/ قراءة المحلول القياسي X تركيز المحلول القياسي = ... مجم / ديسيليتر
AT / AS X Cs = mg/dl
حيث أن :
A
الامتصاص
T
قراءة الاختبار
S
قراءة المحلول القياسي
Cs
تركيز المحلول القياسي
mg/dl
قيمة المركب مقدرة بالميلجرام في كل 100 مل من الدم (ديسيليتر)

استخدام العبوات الجاهزة Kits

تستخدم معظم المعامل حاليا عبوات جاهزة ( أطقم) (Kits) تنتجها العديد من الشركات المتخصصة تحتوي علي جميع المحاليل والكواشف اللازمة لأجراء الاختبار.
وسنتناول فكرة ( أساس) الطرق الشائعة للاختبارات دون التطرف لتفاصيل خطوات الاختبار والتي تختلف تبعا للطريقة التي تقوم الشركة باستخدامها وسنذكر كمثال خطوات تقدير الجلوكوز في الدم ( راجع تقدير الجلوكوز)

الاحتياطات الواجب مراعاتها لضمان سلامة استخدام أطقم الاختبارات Kits

1. حفظ الأطقم في درجة الحرارة المناسبة والمبينة علي العبوة من الخارج.
2. عدم استخدام المحاليل والكواشف بعد انتهاء فترة صلاحيتها طبقا للتاريخ المدون علي العبوة وعلي زجاجات الكواشف.
3. دراسة النشرة جيدا وإتباع آلاتي بكل دقة.

الخطوات المدونة لأجراء الاختبار.
استخدام الطول الموجي المطلوب.
محلول البلانك الواجب استخدامه.
فترة ودرجة حرارة التحصين إن وجد.
طريقة حساب النتائج.
المعدل المرجعي ( المعدل الطبيعي) المدون بالنشرة.
أي ملاحظات خاصة أخري.

ملاحظات :
بعض الأطقم تحتوي علي محاليل مركزة ينبغي تخفيفها بالنسبة المطلوبة وبعضها قد يحتوي علي الكاشف علي هيئة بودرة تذاب في الحجم المدون بالنشرة ، ويراعي فترة الصلاحية بعد التحضير وتكتب علي الزجاجات التي تم تحضيرها بطريقة واضحة وتحفظ في درجة الحرارة المناسبة.
تقوم الشركات بترقيم الكواشف لسهولة تداولها أثناء العمل وتكتب كآلاتي ...... R2- R3– ( R ).R1-اختصار Reagent . ويراعي عند إجراء الاختبار ومنع الكواشف طبقا للترتيب الموجود في الجدول.

الاحتياجات التي ينبغي مراعاتها عند استخدام أجهزة القياس الضوئي :

ضرورة استخدام محلول البلانك لضبط صفر الامتصاص والذي يلغي تداخل الامتصاص الذي يمكن أن ينتج من الكواشف ويجب استخدام وتحضير البلانك بالطريقة المدونة بالنشرة ، والمحلول الخالي ( البلانك) هو محلول يحتوي علي الكواشف التي تستخدم في الاختبار ولا يحتوي علي المركب الذي نقوم بتقديره.
إستعمال كوفيت Cuvettes نظيفة وجافة مع مراعاة تنظيفها من الخارج قبل وضعها في الجهاز.
تجنب وجود فقاعات هواء في الكوفيت مع وضع الحد الأدنى من المحلول والذي يختلف تبعا لنوع الكوفيت.
التأكد من وضع سطح الكوفيت المحدد لمرور الضوء مواجها للمصدر الضوئي.
غلق المكان ووضع الكوفيت قبل القراءة حيث أن ضوء الشمس والمصابيح الكهربائية يؤثر علي القراءة.

مرسبات البروتينات من الدم :

تتطلب بعض الطرق تقدير المركبات الكيميائية في الدم أو المصل أو البلازما ترسيب البروتينات للحصول علي سائل رائق لأجراء الاختبار وهي :

حمض تنجستيك Tungestic Acid:
الطريقة الشائعة لاستخدامه هي إضافة كميات متساوية من تنجستات الصوديوم بتركيز 10% وحمض كبريتك 2/3 عياري( حوالي 18.6 مل في الليتر ) – ينتج حمض تنجستيك من تفاعل المحلولين – وبعض الأطقم يوجد بها حمض تنجستك جاهزا.
حمض ثلاثي كلوريد الخليك بتركيز 10% أو 20%.

تقدير الجلوكوز في الدم :

الجلوكوز هو المصدر الرئيسي للطاقة ، يتحول جزء من الجلوكوز الذي يمتص بعد تناول وجبة بها مواد كربوهيدراتية إلي جليكوجين – يتحول جليكوجين الكبد إلي جلوكوز أثناء الصيام لفترة قصيرة وبذلك يحافظ علي معدل الجلوكوز في الدم .

العينة : بلازما أو مصل
عند استخدام البلازما يفضل أن تؤخذ عينة الدم علي مانع للتجلط من أوكسالات البوتاسيوم وفلوريد الصوديوم – يحضر نسبة 3 أجزاء أوكسالات بوتاسيوم وجزء واحد فلوريد صوديوم
مثلا لتحضير 100 جرام يخلط :
75 جرام أوكسالات بوتاسيوم
25 جرام فلوريد صوديوم
فلوريد الصوديوم يمنع استهلاك الجلوكوز بواسطة خلايا الدم . ويمكن استخدام أوكسالات البوتاسيوم أو الادتا كمانع للتجلط.
يراعي ضرورة فصل البلازما بعد اخذ العينة مباشرة ، وفصل المصل بمجرد تكون الجلطة .
ترك الدم في درجة حرارة الغرفة بدون فصل البلازما أو المصل يؤدي إلي نقص كمية الجلوكوز في العينة نتيجة استهلاكه بواسطة خلايا الدم ، وتقدر كمية النقص بحوالي 5 – 10 مجم/ ديسليتر كل ساعة .
إذا لم يتم إجراء الاختبار بعد فصل البلازما أو المصل يحفظ في الثلاجة .

إجراء تقدير الجلوكوز بطريقة جلوكوز أكسيديز (GOD Glucose Oxidase) تحتوي الأطقم علي الكاشف والمحلول القياسي ، بعضها يحتوي علي الكاشف كمحلول جاهز للاستخدام وبعضها يوجد به الكاشف علي هيئة مسحوق يذاب في حجم الماء المقطر الذي تحدده الشركة المنتجة بالنشرة المرفقة – في هذه الحالة يراعي كتابة تاريخ التحضير وفترة الصلاحية علي الزجاجات التي يتم تحضيرها .
الخطوات :
ترقم 3 أنابيب اختبار B-S-T وتوضع في حامل أنابيب معدني :
[/size]

موضوع: رد: التحليل الكيميائى للدم 2009-07-25, 03:47

توضع الكواشف في كل أنبوبة كآلاتي :

T
S
B
المحاليل
UI microliter
20
-
-
العينة ( بلازما أو مصل)Sample
UI
-
20
-
المحلول القياسي Standard
MI Milliliter
2
2
2
الكاشف Reagent

ترج الأنابيب وتوضع في حمام مائي عند 37 ْ لمدة 10 دقائق ثم تقرا علي جهاز القياس الضوئي عند الطول الموجي المحدد في النشرة.
المعدل المرجعي Reference Range
Fasting Blood Glucose : 70 – 100 mg/dI
Postoprandial ( 2 Hours after meal) :< 120 mg/ dI
جلوكوز صائم في الدم : 70 – 110 مجم / ديسيليتر
جلوكوز بعد الأكل بساعتين : أقل من 120 مجم / ديسيليتر
ملحوظة:
عادة تكتب نتيجة سكر صائم ، سكر بع الأكل بساعتين ويفضل كتابتها بالإنجليزية .
المعدل المرجعي = المعدل الطبيعي
Reference Range = Normal Range
تقدير البولينا في الدم Determination of Blood Urea
العينة: دم أو مصل أو بلازما ويفضل عينة صيام .
تحفظ العينات في الثلاجة لمنه تكاثر البكتيريا التي تؤثر علي البولينا .
طريقة برتلوت Urea Determination with berthlot,s Reaction

تتحول البولينا بواسطة إنزيم يورييز Urease Enzyme إلي أمونيا .
تتفاعل الأمونيا بواسطة الفينول في وجود هيبوكلوريت الصوديوم ويتكون لون ازرق . ينشط التفاعل بواسطة نيتربروسيد الصوديوم .
يجري الاختبار علي خطوتين :

1- يحضن المصل مع إنزيم يورييز عند 37 ْ لمدة 15 دقيقة.
2- ثم تضاف كواشف نيتروبروسيد الصوديوم وهيبوكلوريت الصوديوم إلى أنبوبتي العينة والمحلول القياسي ، وتحضن الأنابيب عند درجة 37 ْ لمدة 15 دقيقة ، ثم يقرا الامتصاص علي جهاز قياس الألوان عند طول موجي 630 نانوميتر .
ملاحظات :
تقدير البولينا في الدم يفيد في تقييم حالات أمراض الكلي حيث يزيد معدلها في هذه الحالات ويوضع في الاعتبار أن معدل البولينا في الدم قد يزيد في بعض حالات أخري فمثلا يزيد معدلها بعد تناول وجبة غنية بالبروتينيات - لذا يجب أن تؤخذ عينة صيام لتقدير البولينا .

علمنا أن تقدير البولينا يعتمد علي تحولها بواسطة إنزيم البورييز إلي امونيا – لذ1 يجب مراعاة آلاتي :

1. عدم استخدام مضادات التجلط آلاتية :

فلوريد الصوديوم حيث يبطل نشاط إنزيم يورييز.
أوكسالات الأمونيوم.

2. الحرص علي عد تلوث الزجاجيات والأدوات المستخدمة بأبخرة الامونيا يفضل عدم استخدام الزجاجيات المستعملة في تحليل البول لاحتمال تلوثها بالأمونيا ( النشادر) .

تقدير الكرياتنين في المصل Serum Creatinine

العينة :مصل أو بلازما – يفضل المصل
يفضل إجراء الاختبار بعد فصل المصل أو حفظ العينة في الثلاجة لحين إجراء الاختبار طريقة جافية Jaffe